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臺北醫學大學 國際醫學研究博士學位學程 吳明順、楊玲玲所指導 Ganbolor Jargalsaikhan的 Phytochemical Properties, in vitro Antioxidant and Anti-Liver Cancer Effect of Rhubarb Species （2020），提出rp-n12 mobile01關鍵因素是什麼，來自於Mongolian rhubarb。
而第二篇論文國立中正大學 化學暨生物化學研究所 陳玉如所指導 洪若維的 開發結合細胞分群與化學分群技術之酪胺酸磷酸化蛋白質體研究 （2013），提出因為有 酪胺酸磷酸化蛋白質體、細胞分群、連續的固定化金屬親和層析、逆向層析分群技術的重點而找出了 rp-n12 mobile01的解答。
Phytochemical Properties, in vitro Antioxidant and Anti-Liver Cancer Effect of Rhubarb Species
為了解決rp-n12 mobile01 的問題，作者Ganbolor Jargalsaikhan 這樣論述：
In the present study, the unofficial rhubarb of Rheum undulatum (RU) and Rumex crispus (RC) were compared with official rhubarb species for their phytochemical properties, antioxidant activities and cytotoxicity on HepG2 cell lines. In addition, 5 solvents of different polarity were used to prepare
rhubarb extracts (n-hexane, ethyl acetate, acetone, ethanol and water). Overall, phytochemical analysis revealed that phenols, flavonoids and anthraquinones were present in all 25 extracts from 5 rhubarb species at different concentrations (the content of phenols, anthraquinones, flavonoids were 1.
93-16.99 mgGAE/gDW; 7.37-179.02 mgEE/gDW; 37.04-192.60 mgQE/gDW; respectively). Next, HPLC analysis showed that RU extracts had the highest concentrations of anthraquinone derivatives including chrysophanol, physcion and emodin. As for antioxidant potential, the phenolic and anthraquinone contents i
n rhubarb extracts were remarkably supportive of their antioxidant abilities by the methods of ABTS, DPPH and FRAP assays (54.8% to 99.0%), except for RC extracts. Otherwise, the iron chelating activities of the rhubarb extracts were not related to their phytochemical contents. Notably, Rheum palmat
um (RP)-n-hexane, Rheum officinale (RO)-ethyl acetate, Rheum tanguticum (RT)-n-hexane, RU-ethanol and RC-acetone extracts required potentially lower doses to inhibit HepG2 cell growth among the rhubarb extracts in a dose- and time- dependent manner. Nevertheless, there was no correlation in the cyto
toxicity of rhubarb extracts with their phytochemical contents or concentrations of anthraquinone derivatives. The ethanol extract of RU significantly induced apoptosis of HepG2 cells as demonstrated by DNA fragmentation, activation of caspase 3 and cleavage of PARP. In conclusion, the comprehensive
effect of RU-ethanol is assumed by the combined effort of the proper ratioed active compounds, indicating that it could be a promising supportive therapeutic agent with gentle effect for liver cancer.
開發結合細胞分群與化學分群技術之酪胺酸磷酸化蛋白質體研究
為了解決rp-n12 mobile01 的問題，作者洪若維 這樣論述：
磷酸化蛋白為非常重要的後轉譯修飾，調控細胞訊息傳遞的過程，在蘇胺酸磷酸化蛋白(phosphothreonine-modifiied protein)、絲胺酸磷酸化蛋白(phosphoserine-modifiied protein)和酪胺酸磷酸化蛋白(phosphotyrosine-modifiied protein) 三種磷酸化修飾中，酪胺酸磷酸化蛋白與許多疾病有著密切的關連，並且亦是許多疾病藥物治療目標。近年來，隨著質譜技術和純化技術的發展，酪胺酸磷酸化蛋白的萃取與鑑定有十足的進展，但由於酪胺酸磷酸化蛋白含量相當的低(1.8%)，造成酪胺酸磷酸化蛋白在質譜的偵測困難，其訊號往往被
其他高含量的磷酸化蛋白所抑制，造成質譜偵測上的困難。為了提高對於酪胺酸磷酸化蛋白的偵測，本論文開發出一項利用結合細胞分群(subcellular fractionation)和化學分群的技術(Ga3+- Fe3+-IMAC與reverse phase fractionation method)，去降低磷酸化樣品當中的複雜度，進而提升酪胺酸磷酸化蛋白的偵測。 於第一部分的論文中，我們發展連續的固定化金屬親和層析(Ga3+- Fe3+-IMAC)方法，經由鎵 (Ga3+)和鐵 (Fe3+)兩項金屬離子對於磷酸化胜肽親和能力的差異，將相對含有較多負價鍵的磷酸化胜肽於第一維固定化金屬親和層析(1
st Ga3+-IMAC)與親和能力較弱的鎵離子反應得到純化分析，接著於第二維固定化金屬親和層析(2nd Fe3+-IMAC)便可經由親和能力較為強的鐵離子將未能於第一維當中得到分析的磷酸化胜肽再做純化分析，進一步提升對於酪胺酸磷酸化胜肽(phosphotyrosine-modifiied peptide)純化上的效率。相較於利用單一鐵離子的固定化金屬親和層析 (Fe3+-IMAC)與連續的固定化金屬親和層析(Ga3+- Fe3+-IMAC)在Raji B 細胞當中的測試，可將磷酸化胜肽的偵測，由4553條磷酸化胜肽與其中421條酪胺酸磷酸化胜肽，提升至5288條磷酸化胜肽與599條酪胺酸磷酸
化胜肽。如果再結合細胞分群(subcellular- Ga3+- Fe3+-IMAC)將Raji B 細胞分離為細胞核、細胞膜與細胞質，進而降低樣品的複雜度，則可將磷酸化胜肽的偵測由5288條磷酸化胜肽與其中599條酪胺酸磷酸化胜肽(11%)，提升至5205條磷酸化胜肽與1388條酪胺酸磷酸化胜肽(26%)，其酪胺酸磷酸化胜肽在磷酸化胜肽當中的比例便經由細胞分群的方法得到提升，並且也在Ga3+- Fe3+-IMAC的連續萃取過程中，分析出在1388條酪胺酸磷酸化胜肽當中，其中較為酸性的酪胺酸磷酸化胜肽(n=1088, 78%)大部分在第一維固定化金屬親和層析被萃取出，另外也在Raji B 細胞
中，經由結合細胞分群(subcellular fractionation)和連續的固定化金屬親和層析(Ga3+- Fe3+-IMAC)，在偵測到的1388條酪胺酸磷酸化胜肽當中，偵測到274條在過去文獻當中還未偵測到的酪胺酸磷酸化胜肽，並且亦有效的提升對於BCR訊息傳遞途徑的偵測範圍。 為了更進一步的做更為全面性並且靈敏的磷酸化蛋白質體學的偵測，在論文第二部分開發出一項微量並且高解析度的逆向層析的分群技術(reverse phase stage tip method)。在HeLa 細胞測試結果中，相較於單一鐵離子的固定化金屬親和層析(Fe3+-IMAC)方法，結合逆向層析的分群技術(Fe
3+-IMAC-RP)可有效的將磷酸化胜肽的偵測由5205提升至7962條磷酸化胜肽，其中約15%為酪胺酸磷酸化胜肽。另外，我們亦去比較在細胞分群(subcellular fractionation)方法於兩項分群實驗(Fe3+-IMAC-RP與subcellular- Ga3+- Fe3+-IMAC)在HeLa 細胞偵測上的差異，此兩方法在磷酸化胜肽和酪胺酸磷酸化胜肽皆僅有20%的重疊偵測機率。 綜合本論文結果，可得知經由本三項技術(1)細胞分群(subcellular fractionation)、(2)連續性固定化金屬親和層析(Ga3+- Fe3+-IMAC)，以及(3)高解析度逆
向層析的分群技術(RP Stage tip fractionation method) ，可有效降低樣品的複雜度，進而提升磷酸化胜肽和酪胺酸磷酸化胜肽的萃取與鑑定，未來可經由三項分餾技術的結合，應用於疾病上做全面性的酪胺酸磷酸化胜肽的偵測與探索。